connexin 62 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405882

Descripción general

GJA10 codifica la conexina 62, una subunidad de los canales de uniones gap que se ensambla en conexones para permitir el intercambio intercelular directo de iones y pequeños metabolitos. El acoplamiento mediado por conexinas favorece la sincronización eléctrica y metabólica, contribuyendo a procesos como la homeostasis tisular, la coordinación del ciclo celular y las respuestas al estrés celular mediante una permeabilidad de las uniones regulada. La alteración de la expresión de conexinas o de la compuerta del canal se asocia ampliamente con una comunicación célula-célula perturbada, con efectos posteriores sobre programas de diferenciación y redes de señalización, incluidas la dinámica del calcio y las vías dependientes de quinasas. Como miembro de la familia de las conexinas, la conexina 62 constituye una diana para investigar cómo la remodelación de las uniones gap influye en fenotipos relevantes para la enfermedad en células humanas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO connexin 62 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen GJA10 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del GJA10 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de GJA10 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína connexin 62.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en GJA10 para la investigación de la señalización de connexin 62, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de GJA10 críticos para la función de connexin 62
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de GJA10 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido connexin 62 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido connexin 62 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus GJA10. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR connexin 62 (h) y el plásmido HDR connexin 62 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología GJA10 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana GJA10 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.