Plásmido CRISPR de Activación (h) Conductin: sc-401386-ACT

AXIN2 codifica Conductina, una proteína de andamiaje que actúa como un regulador negativo clave de la señalización canónica Wnt/β-catenina al promover el ensamblaje del complejo de destrucción de β-catenina y facilitar su recambio. Como diana transcripcional de la señalización Wnt, AXIN2 participa en el control por retroalimentación de la amplitud y la duración de la vía, influyendo en la especificación del destino celular y en programas de proliferación y diferenciación. La expresión o función desregulada de AXIN2 se asocia con una actividad alterada de la vía Wnt, implicada en anomalías del desarrollo y en la biología tumoral, incluidos el cáncer colorrectal y otras neoplasias impulsadas por Wnt. En modelos celulares humanos, AXIN2 sirve como marcador de lectura y modulador de la dinámica de la vía Wnt, relevante para la homeostasis epitelial y la regulación de células madre/progenitoras.

Conductin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de AXIN2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Conductin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus AXIN2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional AXIN2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Conductin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo AXIN2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Conductin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Conductin en células tumorales con expresión de AXIN2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.