COL8A2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-403831-NIC

COL8A2はVIII型コラーゲンのα2鎖をコードしており、特殊な基底膜および細胞外マトリックス（ECM）の構造形成に寄与する、短鎖の非線維性コラーゲンである。眼組織で顕著に発現し、角膜内皮およびデスメ膜の構造を支持するとともに、接着・遊走・分化に影響する細胞—マトリックス相互作用を調節する。COL8A2に関連するECMリモデリングは、インテグリン介在性シグナル伝達、フォーカルアドヒージョンの動態、ならびに組織の生体力学特性や細胞ストレス応答を形作るTGF-β応答性のマトリックスプログラムと交差する。COL8A2の遺伝的変異や発現異常は角膜内皮ジストロフィーと関連しており、ヒトモデルにおけるECM恒常性、プロテオスタシス、内皮細胞生物学を研究する上で重要な標的である。

COL8A2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における COL8A2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、COL8A2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、COL8A2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、COL8A2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。