COL4A3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-419745-ACT

O gene Col4a3 de camundongo codifica a cadeia α3 do colágeno tipo IV (COL4A3), um componente estrutural central das membranas basais que se organiza na rede heterotrimérica α3α4α5(IV). Esse arcabouço da matriz extracelular sustenta a integridade das membranas basais glomerular e tubular, influencia a adesão célula–matriz e a mecanotransdução, e molda a arquitetura tecidual por meio de interações com lamininas, integrinas e enzimas de remodelamento da matriz. O COL4A3 está intimamente associado a vias de organização da membrana basal e de homeostase da matriz extracelular importantes para a função da barreira de filtração renal. A desregulação ou a interrupção genética de Col4a3 é amplamente utilizada para modelar distúrbios hereditários da membrana basal com patologia renal progressiva e fenótipos associados de remodelamento tecidual in vivo e em sistemas de organoides.

COL4A3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Col4a3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

COL4A3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Col4a3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Col4a3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de COL4A3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Col4a3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de COL4A3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via COL4A3 em células tumorais com expressão de Col4a3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.