COL2A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400359

概要

COL2A1はII型コラーゲンのα1鎖をコードしており、硝子軟骨の構造的骨格を形成する主要な線維性コラーゲンとして、細胞外マトリックスの生体力学的特性にも寄与します。II型コラーゲン線維への組み立てやプロテオグリカンとの相互作用を通じて、COL2A1は骨格発生過程における軟骨細胞の分化、マトリックスの組織化、ならびに軟骨の恒常性維持を支えます。COL2A1の発現は、SOX9駆動経路などの軟骨形成に関わる転写プログラムによって制御され、コラーゲンのプロセシング、分泌、細胞外マトリックスのリモデリングに関するネットワークとも協調します。COL2A1の遺伝子破綻や発現制御異常は、遺伝性の軟骨・骨格疾患の幅広いスペクトラムと関連しており、細胞外マトリックス生物学および軟骨細胞病態の研究における重要な標的となっています。

COL2A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCOL2A1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、COL2A1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、COL2A1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、COL2A1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、COL2A1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、COL2A1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• COL2A1の機能に不可欠なCOL2A1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、COL2A1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• COL2A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCOL2A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、COL2A1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  COL2A1 HDRプラスミド（h）および COL2A1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCOL2A1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCOL2A1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。