COL2A1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400359-ACT

COL2A1 は II 型コラーゲンの α1 鎖をコードしており、軟骨の細胞外マトリックスを構成する主要な線維性成分の一つです。COL2A1 はプロテオグリカンとの相互作用を介して、組織の引張強度と保水性を支えます。その発現は、SOX9 によって駆動される転写ネットワークや細胞外マトリックスのリモデリング経路により協調的に制御される、軟骨細胞の分化およびマトリックス組み立てプログラムと密接に結び付いています。COL2A1 の機能が乱れると軟骨の構造的完全性が損なわれ、骨格および関節の生物学に関連する軟骨内骨化の発生過程が障害される可能性があります。COL2A1 の遺伝的変異や発現制御の破綻は、遺伝性の軟骨・骨格異形成症と関連づけられており、細胞外マトリックス恒常性や軟骨細胞系譜の制御を研究するうえで頻繁に標的とされています。

COL2A1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性COL2A1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

COL2A1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における COL2A1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCOL2A1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性COL2A1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCOL2A1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCOL2A1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCOL2A1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCOL2A1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。