COL15A1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404027-ACT

COL15A1 codifica a cadeia alfa 1 do colágeno tipo XV, um colágeno não fibrilar associado à membrana basal que contribui para a organização da matriz extracelular e para a integridade estrutural dos tecidos. Influencia a adesão célula–matriz, a migração e a mecanotransdução ao moldar o microambiente perivascular e intersticial e ao modular a sinalização ligada a integrinas e a adesões focais. A expressão de COL15A1 está associada à homeostase vascular e ao remodelamento do estroma, tornando-o relevante para estudos de angiogênese, fibrose e regulação do microambiente tumoral. A desregulação de COL15A1 tem sido relatada em múltiplos contextos patológicos nos quais a composição da membrana basal e o remodelamento da matriz se encontram alterados.

COL15A1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de COL15A1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

COL15A1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus COL15A1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição COL15A1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de COL15A1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus COL15A1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de COL15A1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via COL15A1 em células tumorais com expressão de COL15A1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.