CRISPRデータではありません：画像はCRISPR実験結果を可視化するための抗体の品質を示しています。
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CNTFRα Double Nickaseプラスミド (h): sc-402322-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- CNTFRα Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- CNTFRαダブルニカースプラスミド（h）およびCNTFRαダブルニカースプラスミド（h2）は、CNTFRを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: CNTFRα 抗体 (AN-B2): sc-9993
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
CNTFRα Double Nickaseプラスミド (h) | sc-402322-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CNTFRα Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-402322-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
繊毛神経栄養因子受容体α（CNTFRα）は、CNTFR 遺伝子によりコードされるグリコシルホスファチジルイノシトール（GPI）アンカー型の受容体サブユニットであり、CNTF 受容体複合体においてリガンド結合特異性を規定する。CNTF が結合すると、CNTFRα は LIFR および gp130 と協調して JAK/STAT シグナル伝達を開始し、さらに MAPK/ERK 経路や PI3K/AKT 経路にも連結して、神経細胞の生存、分化、ならびにグリアの生物学的機能を制御する。CNTFR 経路活性は神経発生および神経変性の文脈で広く研究されており、受容体発現量やシグナルの強度（トーン）の変化が、神経細胞の維持や損傷応答に影響し得る。CNTF/CNTFR 軸シグナルの破綻は、運動ニューロン疾患や網膜疾患モデルにおける疾患関連の細胞表現型と関連づけられており、ヒト細胞系での機序解明研究を支持する。
CNTFRα ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CNTFR 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CNTFR内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CNTFRの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CNTFRが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。