Plasmide CRISPR/Cas9 KO CNP-53 (h): sc-403527
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- CNP-53 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique CNP-53, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: CNP Antibody (C-9): sc-374043
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO CNP-53 (h) | sc-403527 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
NPPC code le peptide natriurétique de type C, et l’isoforme CNP-53 est un peptide bioactif sécrété qui signale principalement via le récepteur 2 des peptides natriurétiques (NPR2/guanylate cyclase B) afin d’augmenter le cGMP intracellulaire. Cette voie régule l’ossification endochondrale et l’homéostasie du cartilage, module le tonus vasculaire et la fonction endothéliale, et influence l’activité des fibroblastes ainsi que le remodelage de la matrice extracellulaire. La signalisation CNP/NPR2 interagit avec les réseaux MAPK et oxyde nitrique–cGMP, façonnant les programmes de prolifération et de différenciation dans des types cellulaires mésenchymateux et vasculaires. Une activité NPPC dérégulée a été associée à des phénotypes touchant la plaque de croissance et le développement squelettique, ainsi qu’à des processus cardiométaboliques et fibrosants pertinents pour la modélisation des maladies.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CNP-53 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène NPPC dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du NPPC, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert NPPC à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CNP-53.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en NPPC pour l'étude de la signalisation de CNP-53, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de NPPC essentiels à la fonction de CNP-53
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de NPPC pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le CNP-53 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CNP-53 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus NPPC. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le CNP-53 plasmide HDR (h) et le CNP-53 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie NPPC pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles NPPC définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.