Plasmide CRISPR d'Activation (h) CMTM4: sc-405296-ACT

CMTM4 (protéine 4 de la famille CMTM contenant un domaine transmembranaire MARVEL, de type CKLF) est une protéine membranaire multipasse de la famille CMTM, impliquée dans la régulation de l’organisation membranaire, du trafic endosomal et de la signalisation liée au système immunitaire. Via son domaine MARVEL, CMTM4 contribue au contrôle de la stabilité et du renouvellement des protéines de surface, notamment en modulant l’abondance de PD-L1 par les voies endosome–lysosome, influençant ainsi la communication cellule–cellule et les mécanismes d’échappement immunitaire. L’expression de CMTM4 a été associée à des programmes de différenciation cellulaire et à des réponses au stress, et des altérations de sa régulation ont été rapportées dans de multiples contextes cancéreux. Ces propriétés font de CMTM4 un nœud pertinent pour étudier le trafic membranaire, la régulation des points de contrôle immunitaires et les interactions tumeur–système immunitaire dans des systèmes modèles humains.

CMTM4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CMTM4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CMTM4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CMTM4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CMTM4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CMTM4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CMTM4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CMTM4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CMTM4 dans les cellules tumorales présentant une expression de CMTM4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.