Clathrin Light Chain B/CLTB Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404228-ACT

CLTB codifica a cadeia leve B da clatrina, um componente central das vesículas revestidas por clatrina que regula a endocitose mediada por receptores e o tráfego intracelular entre a membrana plasmática, os endossomos e a rede trans-Golgi. Ao modular a dinâmica da malha de clatrina junto com a cadeia pesada da clatrina e complexos adaptadores como o AP2, o CLTB contribui para a seleção de carga, o brotamento de vesículas e a reciclagem de vesículas sinápticas em tipos celulares especializados. Esse eixo de tráfego influencia a duração da sinalização e a renovação de receptores, vinculando processos associados ao CLTB à homeostase celular, à proliferação e às respostas ao estresse. O tráfego endocítico desregulado e o transporte dependente de clatrina são frequentemente estudados no contexto da neurobiologia, de vias de entrada viral e de alterações na sinalização de receptores relacionadas ao câncer.

Clathrin Light Chain B/CLTB O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CLTB sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Clathrin Light Chain B/CLTB O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CLTB em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CLTB, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Clathrin Light Chain B/CLTB. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CLTB nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Clathrin Light Chain B/CLTB no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Clathrin Light Chain B/CLTB em células tumorais com expressão de CLTB silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.