Clathrin Light Chain A/CLTA Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-403962-NIC

CLTA codifica a cadeia leve A da clatrina, um componente central das vesículas revestidas por clatrina que, durante a endocitose, modula a montagem e a dinâmica da malha de clatrina em conjunto com a cadeia pesada de clatrina. CLTA dá suporte à internalização mediada por receptores, à reciclagem de vesículas sinápticas e ao tráfego entre a membrana plasmática, endossomos e a rede trans-Golgi, ligando-a a vias que controlam a composição de membrana e a atenuação de sinais. Por meio do seu papel na triagem de carga e no direcionamento endossomal, CLTA influencia a renovação (turnover) de receptores como receptores de fatores de crescimento e receptores imunes, moldando a sinalização a jusante e a homeostase celular. A desregulação do tráfego mediado por clatrina tem sido associada a processos neurodegenerativos, alterações na sinalização metabólica e mudanças relevantes para o câncer na reciclagem de receptores e na captação de nutrientes, tornando CLTA um nó útil para estudos mecanísticos da biologia de vesículas.

Clathrin Light Chain A/CLTA O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus CLTA em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de CLTA. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função CLTA. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com CLTA interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.