Clathrin Light Chain A/CLTA Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403962-ACT

CLTA codifica a cadeia leve A da clatrina, uma subunidade acessória central do revestimento de clatrina que regula a montagem e a dinâmica dos triskelions de clatrina durante a endocitose mediada por clatrina. Ao modular a estabilidade do revestimento e as interações com proteínas adaptadoras, a CLTA sustenta a internalização de receptores, a reciclagem de vesículas sinápticas e o tráfego entre a membrana plasmática e compartimentos endossomais. Esses processos influenciam a renovação da sinalização de receptores de fatores de crescimento e de transportadores de nutrientes, ligando a função da CLTA a vias que governam a homeostase de membrana e a triagem intracelular. O tráfego endocítico desregulado e as perturbações na rede de clatrina são frequentemente estudados em contextos como neurobiologia, biologia de infecções e sinalização oncogênica de receptores, nos quais alterações na captação ou na reciclagem podem remodelar o comportamento celular.

Clathrin Light Chain A/CLTA O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CLTA sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Clathrin Light Chain A/CLTA O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CLTA em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CLTA, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Clathrin Light Chain A/CLTA. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CLTA nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Clathrin Light Chain A/CLTA no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Clathrin Light Chain A/CLTA em células tumorais com expressão de CLTA silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.