Plásmido CRISPR de Activación (m) CKR-9: sc-419702-ACT

El gen murino **Ccr9** codifica el receptor de quimiocinas **CKR-9 (CCR9)**, un GPCR que se une de forma preferente a **CCL25** para guiar el tráfico de leucocitos, especialmente durante el desarrollo de timocitos y la migración (“homing”) de subconjuntos de células T hacia el intestino. La señalización de CCR9 activa vías canónicas de quimiocinas que incluyen respuestas dependientes de **Gαi**, flujo de **calcio** intracelular, **PI3K–AKT** y cascadas **MAPK**, las cuales coordinan la quimiotaxis, la adhesión y la localización tisular. La alteración de la actividad del eje **CCR9–CCL25** se ha relacionado con una inmunidad mucosa desregulada y procesos inflamatorios, y se estudia con frecuencia en contextos como la homeostasis inmunitaria intestinal y la migración de linfocitos. En modelos murinos, la expresión de **Ccr9** también se utiliza como marcador y determinante funcional de programas de células inmunitarias residentes en tejidos y migratorias relevantes para mecanismos de enfermedad mediada por el sistema inmunitario.

CKR-9 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Ccr9 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CKR-9 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Ccr9 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Ccr9, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CKR-9. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Ccr9 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CKR-9 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CKR-9 en células tumorales con expresión de Ccr9 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.