CHSY1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405999-ACT

CHSY1 (condroitina sulfato sintase 1) codifica uma glicosiltransferase residente no Golgi que catalisa a polimerização de cadeias de condroitina sulfato em proteínas centrais de proteoglicanos. Ao impulsionar a biossíntese de glicosaminoglicanos, CHSY1 molda a composição da matriz extracelular e modula a adesão, a migração e a apresentação de fatores de crescimento às células, com efeitos a jusante no padrão de desenvolvimento e na homeostase tecidual. Alterações na montagem de condroitina sulfato estão associadas à desregulação da sinalização de morfógenos e à remodelação da matriz, e variações em CHSY1 têm sido associadas a fenótipos esqueléticos e de membros congênitos, bem como a contextos de proliferação aberrante. Essas características biológicas tornam CHSY1 um ponto útil para estudar a sinalização mediada por proteoglicanos e a regulação do comportamento celular dependente da matriz extracelular.

CHSY1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CHSY1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CHSY1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CHSY1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CHSY1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CHSY1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CHSY1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CHSY1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CHSY1 em células tumorais com expressão de CHSY1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.