CHMP6 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406179

Panoramica

CHMP6 (charged multivesicular body protein 6) è una componente centrale del macchinario ESCRT-III, che coordina il rimodellamento della membrana endosomiale e la biogenesi dei corpi multivescicolari, consentendo lo smistamento del carico e la degradazione lisosomiale. Attraverso la scissione di membrana dipendente da ESCRT, CHMP6 contribuisce a regolare la downmodulation dei recettori, il traffico legato agli esosomi e, più in generale, l’omeostasi della proteostasi e della segnalazione. Alterazioni della via ESCRT sono state associate a difetti nel traffico endolisosomiale, nella citocinesi, nell’autofagia e nel budding virale, processi spesso alterati nel cancro e nella neurodegenerazione. Di conseguenza, CHMP6 viene studiata di frequente per il suo contributo a fenotipi di traffico vescicolare, alla dinamica della segnalazione dei recettori e alle risposte allo stress legate a disfunzioni endosomiali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CHMP6 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CHMP6 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CHMP6 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CHMP6 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CHMP6.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CHMP6 per lo studio della segnalazione di CHMP6, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CHMP6 critici per la funzione di CHMP6
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CHMP6 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CHMP6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CHMP6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CHMP6. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CHMP6 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CHMP6 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CHMP6 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CHMP6 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.