CHMP4A Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402539-ACT

O gene humano **CHMP4A** codifica um componente central da maquinaria **ESCRT-III**, que remodela membranas para promover a formação de vesículas intraluminais durante a biogênese de corpos multivesiculares e a triagem de cargas endossomais. O CHMP4A também participa da abscisão citocinética e ajuda a coordenar eventos de cisão de membrana importantes para o reparo da membrana plasmática e a downregulation (redução) de receptores. Por meio dessas funções, o CHMP4A influencia a proteostase e a atenuação de vias de sinalização, incluindo o controle dependente de tráfego dos efeitos de receptores de fatores de crescimento. A desregulação da função de ESCRT está amplamente associada à sinalização oncogênica, a processos neurodegenerativos e à suscetibilidade a patógenos que exploram o brotamento dependente de ESCRT, tornando o CHMP4A um ponto de interesse para estudos mecanísticos de remodelamento de membranas.

CHMP4A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CHMP4A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CHMP4A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CHMP4A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CHMP4A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CHMP4A. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CHMP4A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CHMP4A no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CHMP4A em células tumorais com expressão de CHMP4A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.