ChM-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403523

概要

CNMDは、軟骨由来の分泌性糖タンパク質であるコンドロモジュリン-1（ChM-1）をコードしており、内皮細胞の挙動や細胞外マトリックスの恒常性を調節することで、軟骨の無血管性微小環境の維持に関与するとされています。ChM-1は、マトリックス沈着、細胞接着、局所的な増殖因子シグナル伝達を協調させる筋骨格系組織における軟骨形成分化プログラムや組織リモデリング過程と関連しています。CNMD発現の変化は、軟骨の変性や修復の文脈で報告されており、骨・関節領域の生物学を研究するための分子レベルの手がかりとして有用であることが示唆されています。さらに、CNMD/ChM-1の活性は、発生や疾患関連の組織リモデリングにおける血管新生抑制や、マトリックスにより制御されるシグナル伝達の解明にも関連します。

ChM-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCNMD遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CNMD内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CNMDのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ChM-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ChM-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CNMD欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ChM-1の機能に不可欠なCNMDエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CNMDゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ChM-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびChM-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CNMD遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ChM-1 HDRプラスミド（h）および ChM-1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCNMDホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCNMD標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。