Plasmide CRISPR/Cas9 KO CHD1L (h): sc-404840

Présentation

CHD1L (protéine 1‑like de liaison à l’ADN de type chromodomain hélicase) est un remodeler de la chromatine dépendant de l’ATP, impliqué dans la régulation de l’accessibilité de l’ADN lors de la transcription, des réponses au stress réplicatif et de la réparation des dommages à l’ADN. Grâce à son activité hélicase/ATPase et à des interactions médiées par le chromodomaine, CHD1L contribue à coordonner la dynamique de la chromatine, ce qui influence la stabilité du génome et la progression du cycle cellulaire. Une expression altérée de CHD1L ou un gain du nombre de copies a été rapporté dans de multiples contextes tumoraux, et CHD1L est fréquemment étudié pour ses liens avec des programmes transcriptionnels oncogéniques, la tolérance au stress réplicatif et des phénotypes invasifs. Ces caractéristiques font de CHD1L une cible pertinente pour analyser le contrôle, dépendant de la chromatine, de l’expression génique et du choix des voies de réparation de l’ADN.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CHD1L (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CHD1L dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CHD1L, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CHD1L à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CHD1L.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CHD1L pour l'étude de la signalisation de CHD1L, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CHD1L essentiels à la fonction de CHD1L
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CHD1L pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CHD1L plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CHD1L plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CHD1L. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CHD1L plasmide HDR (h) et le CHD1L (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CHD1L pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CHD1L définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.