Plasmide CRISPR d'Activation (h) CEMIP: sc-412779-ACT

CEMIP (cell migration-inducing hyaluronidase 1) code une protéine liant l’hyaluronane, à la fois sécrétée et intracellulaire, qui module le remodelage de la matrice extracellulaire en favorisant la dépolymérisation et le renouvellement de l’hyaluronane. En régulant le métabolisme de l’hyaluronane, CEMIP influence l’adhérence cellulaire, la motilité et les interactions avec le stroma, reliant la dynamique de la matrice à des processus de signalisation tels que les programmes associés à l’EMT et les réponses au microenvironnement inflammatoire. Une expression altérée de CEMIP a été associée à la progression tumorale, à l’invasion et au potentiel métastatique dans de multiples contextes cancéreux, et elle est également impliquée dans la physiopathologie des tissus conjonctifs et du cartilage via ses effets sur l’homéostasie matricielle. Ces propriétés font de CEMIP une cible utile pour étudier, dans des systèmes modèles humains, la régulation du comportement cellulaire, le remodelage tissulaire et des phénotypes pertinents pour les maladies, induits par la MEC.

CEMIP Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CEMIP sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CEMIP Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CEMIP dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CEMIP, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CEMIP. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CEMIP natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CEMIP au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CEMIP dans les cellules tumorales présentant une expression de CEMIP silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.