Cdx2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401220-ACT

CDX2は、腸管の発生、上皮の分化、ならびに前後軸パターニングプログラムの維持を司る主要な制御因子である、尾側型ホメオボックス転写因子Cdx2をコードしています。Cdx2は、消化管組織において細胞運命の規定、バリア機能、系譜に制限された転写プログラムに関与する遺伝子ネットワークを制御し、Wnt/β-カテニン、BMP、Notch関連のシグナル伝達環境と統合的に作用します。CDX2発現の破綻や、CDX2依存的な転写回路の変化は、異常な分化状態や消化管病態と関連づけられており、ヒトのモデル系では腸管系譜アイデンティティのマーカーとして広く用いられています。配列特異的DNA結合因子として、Cdx2は、上皮の可塑性に伴うエンハンサー利用、クロマチン状態の遷移、転写ネットワークの再編成を解明するための解析しやすい結節点（ノード）となります。

Cdx2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CDX2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Cdx2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CDX2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCDX2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Cdx2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCDX2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCdx2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCDX2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCdx2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。