CDKN1B/Kip1 p27 Plasmide Double Nickase (m): sc-419608-NIC

Cdkn1b codifica l’inibitore delle chinasi ciclina‑dipendenti p27^Kip1 (CDKN1B), un importante regolatore negativo della progressione del ciclo cellulare che limita l’attività di CDK2–ciclina E/A e contribuisce a mantenere il checkpoint G1/S. p27 integra i segnali mitogenici con il controllo della crescita attraverso vie che includono la segnalazione PI3K–AKT, in cui la localizzazione subcellulare dipendente dalla fosforilazione e il turnover proteasomiale modulano la sua funzione inibitoria. Nei sistemi murini, l’alterazione del dosaggio o della regolazione di Cdkn1b è ampiamente utilizzata per studiare l’equilibrio tra proliferazione e differenziamento, l’omeostasi tissutale e i programmi di senescenza cellulare. Un’espressione o una stabilità deregolate di p27 sono frequentemente associate a un controllo anomalo del ciclo cellulare nei modelli di biologia dei tumori e a fenotipi iperproliferativi in contesti di sviluppo e rigenerazione.

CDKN1B/Kip1 p27 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Cdkn1b nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Cdkn1b. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Cdkn1b. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Cdkn1b interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.