CDK5RAP3 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-408965-LAC

CDK5RAP3 (também conhecida como C53) é uma proteína citoplasmática e perinuclear multifuncional, implicada na regulação da progressão do ciclo celular, da sinalização adaptativa ao estresse e da homeostase proteica. Ela tem sido associada à modulação de vias dependentes de quinases, de processos dependentes de ubiquitina e do controle de qualidade associado ao retículo endoplasmático, conectando-a às respostas celulares ao estresse proteotóxico e metabólico. Por meio dessas funções, a CDK5RAP3 é estudada em contextos nos quais proliferação, apoptose e programas adaptativos de estresse são remodelados, incluindo sinalização oncogênica e fenótipos associados à inflamação. Alterações na expressão de CDK5RAP3 foram relatadas em múltiplos tipos de tumor, motivando pesquisas mecanísticas sobre como ela influencia o controle do crescimento e a comunicação cruzada entre vias em células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais CDK5RAP3 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de CDK5RAP3 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais CDK5RAP3 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição CDK5RAP3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de CDK5RAP3. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo CDK5RAP3 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.