CDK5RAP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-407278

概要

CDK5RAP1（CDK5 regulatory subunit–associated protein 1）はラジカルS-アデノシルメチオニン（SAM）酵素で、主にミトコンドリアに局在し、ミトコンドリアtRNAの転写後修飾を触媒することで、正確なミトコンドリア翻訳と呼吸鎖の恒常性を支えています。ミトコンドリアのプロテオスタシスおよび酸化的リン酸化能を調節することにより、CDK5RAP1は細胞のエネルギー代謝、レドックスバランス、ストレス適応応答に影響を及ぼします。CDK5RAP1活性の変化はミトコンドリア機能の破綻と関連づけられており、代謝リプログラミング、低酸素適応、酸化ストレス下でのゲノム安定性といった文脈でしばしば研究されています。これらの経路により、CDK5RAP1はがん生物学をはじめ、ミトコンドリア機能障害を特徴とするさまざまな疾患における作用機序研究の重要な標的となっています。

CDK5RAP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCDK5RAP1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CDK5RAP1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CDK5RAP1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CDK5RAP1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CDK5RAP1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CDK5RAP1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CDK5RAP1の機能に不可欠なCDK5RAP1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CDK5RAP1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CDK5RAP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCDK5RAP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CDK5RAP1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CDK5RAP1 HDRプラスミド（h）および CDK5RAP1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCDK5RAP1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCDK5RAP1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。