Cdk5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400161-ACT

O CDK5 codifica a quinase 5 dependente de ciclina (Cdk5), uma quinase de serina/treonina direcionada por prolina que é ativada principalmente pelos cofatores não ciclina p35 (CDK5R1) e p39 (CDK5R2). A Cdk5 regula o desenvolvimento e a função neuronais por meio do controle da dinâmica do citoesqueleto, do direcionamento axonal, do tráfego de vesículas sinápticas e da sinalização dependente de atividade, com efeitos a jusante em redes de fosforilação que moldam a neuroplasticidade. Além do sistema nervoso, o CDK5 contribui para a migração celular, a adesão e as respostas ao estresse por meio de interações com vias como a sinalização MAPK, a sinalização de adesão focal e a regulação de programas transcricionais. A atividade desregulada da Cdk5 e os padrões de fosforilação de seus substratos têm sido associados a mecanismos de doenças neurodegenerativas e neuropsiquiátricas e também são investigados em modelos de motilidade e invasão de células tumorais.

Cdk5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CDK5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Cdk5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CDK5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CDK5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Cdk5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CDK5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Cdk5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Cdk5 em células tumorais com expressão de CDK5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.