CDK11 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405330-ACT

O CDK19 humano codifica uma quinase dependente de ciclina que atua como componente regulador do módulo CDK associado ao Mediador, coordenando a transcrição responsiva a estímulos com o controle do ciclo celular. Ao influenciar programas transcricionais da RNA polimerase II, o CDK19 contribui para a regulação da proliferação, da sinalização de estresse e da diferenciação por meio de vias ligadas à MAPK e a outras redes responsivas a fatores de crescimento. A atividade desregulada de CDK19 e a sinalização da quinase do Mediador têm sido associadas à reprogramação transcricional na biologia do câncer e a respostas celulares alteradas a estímulos genotóxicos e inflamatórios. Essas propriedades tornam os estudos do eixo CDK19/CDK11 relevantes para dissecar o controle de expressão gênica específico de contexto em células humanas.

CDK11 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CDK19 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CDK11 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CDK19 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CDK19, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CDK11. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CDK19 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CDK11 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CDK11 em células tumorais com expressão de CDK19 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.