CD97 Double Nickaseプラスミド (h): sc-404492-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- CD97 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- CD97ダブルニカースプラスミド（h）およびCD97ダブルニカースプラスミド（h2）は、ADGRE5を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: CD97 抗体 (G-8): sc-166852
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
CD97 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-404492-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CD97 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-404492-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ADGRE5はCD97をコードしており、CD97は白血球に高発現する接着性Gタンパク質共役受容体（GPCR）で、免疫系および間質系コンパートメントにおける細胞間相互作用や細胞—細胞外マトリックス相互作用に関与している。CD97はCD55/DAFやコンドロイチン硫酸などのリガンドと結合し、炎症性シグナル伝達や細胞骨格の再構築と交差する接着・遊走・活性化プログラムを協調的に制御する。GPCRに連動したシグナル伝達と細胞表面での受容体—リガンド動態を介して、CD97は白血球のトラフィッキング、組織への浸潤、免疫監視に影響を及ぼし得る。CD97の発現や活性の破綻は炎症性病態や腫瘍微小環境の生物学と関連づけられており、免疫制御の機構研究や疾患関連の細胞挙動の解明において重要な標的であることを示している。
CD97 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ADGRE5 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ADGRE5内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ADGRE5の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ADGRE5が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。