CD88 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419395

概要

C5ar1 は、補体アナフィラトキシン C5a の古典的な G タンパク質共役型受容体である CD88 をコードしており、好中球、単球、マクロファージなどの骨髄系細胞に高発現しています。リガンドが結合すると、CD88 は Gi 依存性シグナル伝達を活性化し、走化性、カルシウム動員、MAPK および PI3K 経路、酸化バースト、サイトカイン産生を誘導して、補体系からのシグナルを自然免疫の活性化へと統合します。この受容体は炎症増幅と白血球の動員に関与し、Fc 受容体シグナルやパターン認識経路とも交差して、組織傷害および修復応答を形作ります。C5a–CD88 シグナルの破綻は、敗血症、自己免疫性炎症、虚血再灌流障害、神経炎症のモデルで関与が示されており、C5ar1 は免疫病理の機序研究に有用な標的（ノード）となっています。

CD88 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるC5ar1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、C5ar1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、C5ar1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CD88タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CD88シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、C5ar1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CD88の機能に不可欠なC5ar1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、C5ar1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CD88 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびCD88 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、C5ar1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CD88 HDRプラスミド（m）および CD88 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはC5ar1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のC5ar1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。