CD8-β Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400950-ACT

CD8B codifica a cadeia CD8-β, uma glicoproteína transmembranar do tipo I que se associa à CD8-α para formar o correceptor CD8 em linfócitos T citotóxicos e em um subgrupo de células NK. Ao se ligar ao MHC de classe I e se associar à quinase LCK da família Src, o CD8 potencializa a transdução de sinais do receptor de células T (TCR), favorece a formação da sinapse imunológica e contribui para a seleção tímica e para a diferenciação de células efetoras. A expressão de CD8B e a função do correceptor CD8 estão intimamente relacionadas a respostas citotóxicas específicas a antígenos, à vigilância imunológica e à dinâmica de exaustão de células T em infecções crônicas e em microambientes tumorais. Sinalização desregulada associada ao CD8 e estados alterados de células T CD8+ são frequentemente investigados em imunologia do câncer, autoimunidade e pesquisas sobre imunodeficiências primárias.

CD8-β O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CD8B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CD8-β O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CD8B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CD8B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CD8-β. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CD8B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CD8-β no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CD8-β em células tumorais com expressão de CD8B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.