CD8-α CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400372

概要

CD8AはCD8-αをコードしており、これはI型膜貫通型糖タンパク質で、T細胞および一部のNK細胞上でCD8ααホモ二量体、またはCD8αβヘテロ二量体を形成し、MHCクラスIに制限された抗原認識における共受容体として機能します。CD8-αはMHC Iに結合し、LCKと会合することでTCRシグナル伝達、免疫シナプス形成、ならびに細胞傷害性エフェクターへの分化やサイトカイン産生を制御する下流経路を促進します。CD8Aの発現は、細胞傷害性リンパ球の状態を定義し、系譜決定、活性化、疲弊プログラムを解析するために広く用いられています。CD8-α依存的シグナル伝達およびCD8陽性T細胞表現型の制御異常は、腫瘍免疫微小環境、慢性ウイルス感染、自己免疫、免疫不全の研究文脈で重要です。

CD8-α CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCD8A遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CD8A内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CD8Aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CD8-αタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CD8-αシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CD8A欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CD8-αの機能に不可欠なCD8Aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CD8Aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CD8-α CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCD8-α CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CD8A遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CD8-α HDRプラスミド（h）および CD8-α HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCD8Aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCD8A標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。