Plasmide CRISPR d'Activation (h) CD68: sc-400211-ACT

CD68 (également appelé macrosialine) code une protéine membranaire lysosomale/endosomale fortement glycosylée, très enrichie dans les monocytes, les macrophages et les microglies, où elle est couramment utilisée comme marqueur de l’abondance des phagolysosomes et de l’état d’activation des cellules myéloïdes. CD68 participe au trafic endocytique et à des processus associés à la phagocytose, reliant la signalisation de l’immunité innée à la fonction lysosomale et au traitement des antigènes. Des variations d’expression de CD68 accompagnent l’activation des macrophages et des microglies dans des contextes de remodelage tissulaire inflammatoire, de dysfonction métabolique et de neuroinflammation, reflétant des changements des programmes de différenciation et d’activation myéloïdes. En tant qu’indicateur de l’état des cellules myéloïdes, CD68 est fréquemment évalué en parallèle des voies des cytokines, des interférons et du métabolisme lipidique afin de relier le phénotype cellulaire aux microenvironnements immunitaires.

CD68 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CD68 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CD68 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CD68 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CD68, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CD68. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CD68 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CD68 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CD68 dans les cellules tumorales présentant une expression de CD68 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.