CD55 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-419939-ACT

Cd55はCD55（decay-accelerating factor：DAF）をコードしており、CD55はグリコシルホスファチジルイノシトール（GPI）アンカー型の細胞表面制御因子として、C3/C5コンバターゼの崩壊（decay）を促進することで補体介在性の傷害から宿主細胞を保護します。補体増幅を制限することにより、CD55は自然免疫シグナル伝達、オプソニン化の動態、ならびに組織バリアや血管内における炎症性クロストークに影響を及ぼします。マウスモデルでは、CD55活性の変化が補体活性化の制御不全と関連し、免疫駆動性病態への感受性、感染の転帰、腫瘍―免疫相互作用を左右し得ることが示されています。そのため、CD55の発現は、補体制御、白血球―内皮相互作用、微小環境における炎症に関する研究において重要です。

CD55 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Cd55の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CD55 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Cd55 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCd55転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CD55の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCd55遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCD55依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCd55発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCD55経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。