CD37 Double Nickaseプラスミド (h): sc-404423-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- CD37 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- CD37ダブルニカースプラスミド（h）およびCD37ダブルニカースプラスミド（h2）は、CD37を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: CD37 抗体 (M-B372): sc-23924
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
CD37 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-404423-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CD37 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-404423-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CD37はテトラスパニンファミリーに属する細胞表面糖タンパク質で、成熟B細胞やその他の白血球サブセットに高発現しており、受容体シグナル伝達、接着、細胞内輸送を協調させる膜マイクロドメインの編成に関与します。相互作用タンパク質を足場として配置し、B細胞受容体近傍のシグナル伝達を調節することで、CD37は活性化閾値、増殖、生存を制御する下流経路に影響を及ぼします。また、免疫シナプス形成やエンドサイトーシス過程にも寄与し、抗原の取り扱いおよび細胞間コミュニケーションの在り方を形作ります。CD37の発現や機能の変化は免疫調節異常やB細胞性悪性腫瘍の病態に関与することが示唆されており、リンパ系シグナル伝達研究における機序的マーカーとしての利用を支持しています。
CD37 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CD37 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CD37内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CD37の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CD37が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。