CD33 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401011-ACT

O CD33 humano codifica uma lectina do tipo imunoglobulina ligante de ácido siálico (Siglec-3), expressa predominantemente em células da linhagem mieloide, onde atua como um recetor inibitório que atenua a ativação celular. Por meio da sinalização via motivo inibitório baseado em tirosina de recetores imunológicos (ITIM) e do recrutamento de fosfatases como SHP-1/2, o CD33 modula os limiares da imunidade inata, as respostas de citocinas e os programas fagocíticos. O CD33 participa no reconhecimento de glicanos sialilados e influencia vias que regulam a diferenciação mieloide, o processamento de antigénios e a sinalização inflamatória. Alterações na expressão e na sinalização do CD33 têm sido associadas a neoplasias mieloides e a contextos de neuroinflamação, sustentando o seu uso como marcador e nó mecanístico na investigação em biologia hematopoiética e imunológica.

CD33 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CD33 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CD33 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CD33 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CD33, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CD33. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CD33 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CD33 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CD33 em células tumorais com expressão de CD33 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.