CD300E Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-415572-ACT

CD300E codifica um imunorreceptor da família CD300, expresso predominantemente em células da linhagem mieloide, nas quais participa da regulação da ativação da imunidade inata. O engajamento de CD300E influencia redes de sinalização que coordenam a produção de citocinas inflamatórias, a ativação de fagócitos e a função de células apresentadoras de antígeno, interagindo com vias associadas a ITAM e com cascatas de quinases a jusante que moldam as respostas celulares a patógenos e a danos teciduais. Ao modular os estados de ativação mieloide, CD300E é relevante para estudos de desregulação imune em inflamação crônica, autoimunidade e remodelamento mieloide associado a tumores. Sua dinâmica de expressão e seu perfil de sinalização o tornam uma ferramenta molecular útil para dissecar o controle mediado por receptores em monócitos, macrófagos e células dendríticas.

CD300E O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CD300E sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CD300E O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CD300E em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CD300E, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CD300E. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CD300E nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CD300E no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CD300E em células tumorais com expressão de CD300E silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.