CD300A CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-416522

概要

CD300A（IRp60とも呼ばれる）は、単球、マクロファージ、および一部の樹状細胞サブセットを含む骨髄系細胞に主として発現する免疫グロブリンスーパーファミリー受容体をコードします。CD300Aは細胞質尾部に存在する免疫受容体チロシン阻害モチーフ（ITIM）を介してSHP-1/2などのホスファターゼをリクルートし、活性化シグナル伝達カスケードを抑制して、サイトカイン産生、貪食、免疫複合体応答を調節します。CD300Aシグナルは自然免疫受容体の経路と交差し、組織微小環境における炎症性活性化の閾値や細胞間クロストークのあり方を規定します。CD300Aの発現やシグナル伝達の変化は、自己免疫疾患やアレルギー疾患、腫瘍免疫学研究などの文脈で、炎症制御や免疫恒常性の破綻と関連づけられています。

CD300A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCD300A遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CD300A内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CD300Aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CD300Aタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CD300Aシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CD300A欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CD300Aの機能に不可欠なCD300Aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CD300Aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CD300A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCD300A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CD300A遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CD300A HDRプラスミド（h）および CD300A HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCD300Aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCD300A標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。