CD3-γ CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402537-ACT

CD3Gは、抗原認識を細胞内シグナル伝達へと結び付けるT細胞受容体（TCR）-CD3複合体の必須構成要素であるCD3-γをコードしています。CD3δ、CD3ε、CD3ζとの複合体形成を通じて、CD3-γはLCKやZAP70が関与するリン酸化依存的なシグナル伝達カスケードの起動を助け、さらに下流のMAPK、NF-κB、NFAT経路を介してT細胞の活性化、増殖、サイトカイン産生を制御します。CD3Gの発現量や機能の変化は、胸腺細胞の発生やTCRシグナルの閾値を乱し得るため、本遺伝子は免疫調節異常の表現型や免疫不全に関連する機序との関わりが示唆されます。TCR複合体の中核サブユニットとして、CD3-γはリンパ球生物学、獲得免疫シグナル伝達、ならびに炎症性刺激に対する応答を形作る経路間クロストークの研究において広く解析されています。

CD3-γ CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CD3Gの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CD3-γ CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CD3G 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCD3G転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CD3-γの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCD3G遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCD3-γ依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCD3G発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCD3-γ経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。