CD28 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419541
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- CD28 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico CD28, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CD28 Anticuerpo (3H1179): sc-70612
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
CD28 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-419541 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Cd28 codifica CD28, un receptor coestimulador clave en las células T que potencia la señalización del TCR para favorecer la activación completa, la producción de IL-2, la proliferación y la supervivencia. La unión de CD28 a CD80/CD86 en las células presentadoras de antígeno activa los programas PI3K–AKT–mTOR y los programas transcripcionales de NF-κB/AP-1, moldeando la diferenciación efectora y la reprogramación metabólica. Al establecer umbrales de activación y promover la homeostasis de las células T reguladoras, CD28 influye en la tolerancia periférica, la inflamación crónica y los fenotipos de desregulación inmunitaria observados en modelos murinos de autoinmunidad e infección. La alteración de la señalización de CD28 también es relevante para la evasión inmunitaria tumoral y para estudios de inmunopatología que analizan redes de puntos de control y coestimulación.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO CD28 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Cd28 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Cd28 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Cd28 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CD28.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Cd28 para la investigación de la señalización de CD28, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Cd28 críticos para la función de CD28
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Cd28 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido CD28 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido CD28 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Cd28. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CD28 (m) y el plásmido HDR CD28 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Cd28 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Cd28 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.