CD27L Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402625-ACT

O CD70 humano (CD27L) é um membro transmembranar do tipo II da superfamília de ligantes do TNF, expresso principalmente em células apresentadoras de antígeno ativadas e em subpopulações de linfócitos. Ao interagir com o CD27 em células T, células B e células NK, o CD70 sustenta a sinalização coestimuladora que molda a expansão clonal, a sobrevivência e a diferenciação, influenciando respostas de centro germinativo e a memória imunológica. Esse eixo integra-se a programas transcricionais ligados a NF-κB e MAPK a jusante da sinalização da família TNFR e contribui para a produção de citocinas e a função efetora citotóxica. A expressão desregulada de CD70 tem sido associada a ativação imune alterada e fenótipos de evasão imune em múltiplos contextos de pesquisa em inflamação e oncologia, tornando-o relevante para estudos de imunologia tumoral e homeostase imunológica.

CD27L O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CD70 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CD27L O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CD70 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CD70, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CD27L. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CD70 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CD27L no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CD27L em células tumorais com expressão de CD70 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.