Plasmide Double Nickase (m) CD274/PD-L1: sc-425636-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) CD274/PD-L1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide CD274/PD-L1 Double Nickase (m) et le plasmide CD274/PD-L1 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Cd274. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: CD274/PD-L1 Antibody (D-8): sc-518027
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) CD274/PD-L1 | sc-425636-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) CD274/PD-L1 | sc-425636-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin Cd274 code CD274/PD-L1, un ligand de point de contrôle immunitaire transmembranaire de type I qui se lie à PD-1 (PDCD1) et atténue la signalisation du récepteur des lymphocytes T, la production de cytokines et l’activité cytotoxique. L’expression de PD-L1 est induite par des signaux inflammatoires tels que l’IFN-γ via la voie JAK/STAT et s’intègre à des programmes dépendants de NF-κB qui modèlent la présentation de l’antigène et la tolérance immunitaire dans les tissus. Dans les cellules hématopoïétiques et non hématopoïétiques, CD274 contribue à la régulation de la tolérance périphérique, à l’homéostasie de l’immunité adaptative et à l’équilibre entre réponses effectrices et régulatrices. Une expression dérégulée de PD-L1 est largement associée à l’échappement immunitaire dans les modèles de cancer ainsi qu’à des phénotypes immunitaires altérés en contexte d’inflammation chronique et d’auto-immunité, faisant de Cd274 un nœud clé pour la recherche en immunologie et sur le microenvironnement tumoral.
CD274/PD-L1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Cd274 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Cd274. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Cd274. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Cd274.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.