CD137L Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404974-ACT

TNFSF9 codifica o CD137L (4-1BBL), um ligante da superfamília do TNF expresso em células apresentadoras de antígeno, que se liga ao CD137/TNFRSF9 em células T ativadas e células NK para amplificar a sinalização coestimuladora. As interações CD137L–CD137 promovem a maturação da sinapse imune, a produção de citocinas e programas de sobrevivência por meio das vias de NF-κB e MAPK, moldando respostas citotóxicas e de memória. Esse eixo contribui para a regulação de microambientes inflamatórios e para a comunicação cruzada entre células imunes em contextos como autoimunidade, infecção crônica e imunidade antitumoral, nos quais a coestimulação alterada pode deslocar a função efetora e favorecer a exaustão. Além disso, a sinalização de CD137L pode influenciar estados de ativação mieloide e a dinâmica de apresentação de antígenos relevantes para modelos de pesquisa em imunologia e oncologia.

CD137L O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TNFSF9 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CD137L O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TNFSF9 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TNFSF9, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CD137L. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TNFSF9 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CD137L no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CD137L em células tumorais com expressão de TNFSF9 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.