CD137 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-423447-ACT

O gene murino Tnfrsf9 codifica o CD137 (4-1BB), uma molécula coestimuladora induzível da superfamília de receptores de TNF, expressa em células T ativadas e em outros subconjuntos imunes. A ativação do CD137 promove sobrevivência, proliferação e diferenciação efetora por meio de sinalização dependente de TRAF, que ativa as vias de NF-κB e MAPK, modulando a produção de citocinas e as respostas citotóxicas. Esse eixo contribui para a regulação da homeostase imune, da sinalização inflamatória e da imunidade antiviral e antitumoral, sendo frequentemente estudado em modelos de autoimunidade, infecção e imunologia tumoral. A sinalização desregulada de CD137 pode alterar a exaustão de células T, a formação de memória e o crosstalk mieloide–linfoide, tornando o Tnfrsf9 um ponto valioso para estudos mecanísticos de modulação imune.

CD137 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Tnfrsf9 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CD137 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Tnfrsf9 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Tnfrsf9, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CD137. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Tnfrsf9 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CD137 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CD137 em células tumorais com expressão de Tnfrsf9 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.