CRISPRデータではありません：画像はCRISPR実験結果を可視化するための抗体の品質を示しています。
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CD133 Double Nickaseプラスミド (h): sc-418263-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- CD133 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- CD133ダブルニカースプラスミド（h）およびCD133ダブルニカースプラスミド（h2）は、PROM1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: CD133 抗体 (E-11): sc-365537
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
CD133 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-418263-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CD133 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-418263-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PROM1はCD133（プロミニン1）をコードしており、血漿膜の突起部や微絨毛に豊富に存在する5回膜貫通型の糖タンパク質で、膜の組織化や細胞極性の維持に寄与します。ヒト組織では、CD133は幹細胞／前駆細胞様の区画を示すマーカーとして用いられ、細胞状態の不均一性、自己更新プログラム、分化の軌跡の研究に頻繁に利用されています。PROM1に関連する生物学は、Wnt/β-カテニン、Notch、PI3K–AKT活性に結びつくシグナル伝達および転写プログラム、ならびに上皮構造や小胞動態を制御するプロセスと交差します。CD133発現の変化は複数の悪性腫瘍や組織リモデリングの文脈で報告されており、臨床的有用性を示唆するものではないものの、腫瘍の開始、浸潤、治療抵抗性サブポピュレーションの研究における重要性を支持します。
CD133 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における PROM1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、PROM1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、PROM1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、PROM1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。