CD133 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-437381-ACT

Prom1 codifica a glicoproteína de membrana pentaspânica CD133, um marcador de superfície celular enriquecido em compartimentos de células-tronco e progenitoras de múltiplos tecidos de camundongo. A CD133 localiza-se em protrusões da membrana plasmática e tem sido associada à regulação da polaridade celular, da organização de membrana e de programas de sinalização que influenciam a autorrenovação e o comprometimento de linhagem, incluindo processos relacionados a Wnt/β-catenina, PI3K–AKT, Notch e Hedgehog. Alterações na expressão de PROM1/CD133 são frequentemente associadas a fenótipos de células iniciadoras de tumor, potencial metastático e assinaturas de resistência a terapias em diversos modelos de câncer, e também são estudadas no contexto de regeneração tecidual e neurodesenvolvimento. Em sistemas murinos, Prom1 oferece uma ferramenta acessível para investigar estados semelhantes aos de células-tronco, organização epitelial e trajetórias de diferenciação por meio de abordagens de perturbação genética.

CD133 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Prom1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CD133 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Prom1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Prom1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CD133. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Prom1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CD133 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CD133 em células tumorais com expressão de Prom1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.