Plasmide CRISPR/Cas9 KO CCL14 (h): sc-406423

Présentation

CCL14 code une chimiokine CC sécrétée qui contribue à coordonner le trafic des leucocytes en se liant à des récepteurs de chimiokines présents sur les monocytes, les lymphocytes et d’autres sous-populations de cellules immunitaires, modulant ainsi les gradients inflammatoires et le positionnement des cellules immunitaires au sein des tissus. En tant qu’élément du vaste réseau des chimiokines, CCL14 participe à la chimiotaxie, à la modulation de la signalisation des cytokines et au dialogue avec des voies impliquées dans l’activation endothéliale et le remodelage de la matrice extracellulaire. Une signalisation des chimiokines dérégulée impliquant CCL14 a été associée à des modifications des profils d’infiltration immunitaire observées dans les états inflammatoires chroniques et l’inflammation associée aux tumeurs, où des changements dans les signaux chimiokiniques peuvent influencer la surveillance immunitaire et les interactions avec le stroma. En conséquence, CCL14 est fréquemment étudiée dans des contextes tels que les essais de migration des cellules immunitaires, le profilage des voies de signalisation inflammatoire et la cartographie à l’échelle des systèmes des réseaux de chimiokines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CCL14 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CCL14 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CCL14, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CCL14 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CCL14.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CCL14 pour l'étude de la signalisation de CCL14, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CCL14 essentiels à la fonction de CCL14
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CCL14 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CCL14 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CCL14 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CCL14. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CCL14 plasmide HDR (h) et le CCL14 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CCL14 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CCL14 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.