CCDC23 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-415702-LAC

SVBP codifica a pequena proteína de ligação à vasohibina, também conhecida como CCDC23, que atua como um cofator essencial das proteínas vasohibina e sustenta a sua atividade de carboxipeptidase da tubulina, responsável pela detirosinação da α-tubulina. Ao regular modificações pós-traducionais dos microtúbulos, SVBP influencia a dinâmica do citoesqueleto, a organização do fuso mitótico, o tráfego intracelular e a migração celular. Alterações na detirosinação dos microtúbulos têm sido implicadas em defeitos na divisão celular e em fenótipos associados à motilidade, estabelecendo uma ligação mecanística com vias relevantes para a biologia do cancro e para processos do neurodesenvolvimento. Assim, a modulação da expressão de SVBP/CCDC23 é útil para estudar a sinalização dependente de microtúbulos, o transporte de organelos e a remodelação do citoesqueleto em células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais CCDC23 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de SVBP numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais CCDC23 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição SVBP, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de CCDC23. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo SVBP e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.