CCDC109A Double Nickaseプラスミド (h): sc-413850-NIC

MCU（CCDC109A）は、ミトコンドリア内膜を介した Ca²⁺取り込みを担うミトコンドリアカルシウムユニポーター複合体の、孔形成サブユニットをコードします。ミトコンドリアの Ca²⁺トランジェントを形成することで、MCU は細胞質のシグナル伝達を酸化的リン酸化、TCA 回路デヒドロゲナーゼの活性化、ならびに活性酸素種（ROS）恒常性と結び付け、ATP 産生と代謝柔軟性に影響を与えます。MCU 依存的な Ca²⁺制御は、ミトコンドリア透過性遷移やアポトーシス関連経路とも連動し、ストレス応答や細胞運命決定に作用します。MCU 活性の破綻は、心代謝機能障害、神経変性、腫瘍生物学などの文脈で、エネルギー代謝と Ca²⁺シグナルの異常と関連付けられており、ミトコンドリアシグナルの機序研究において頻繁に標的とされています。

CCDC109A ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における MCU 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、MCU内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、MCUの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、MCUが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。