Partículas Lentivirales de Activación (h) caveolin-3: sc-400569-LAC

CAV3 codifica la caveolina-3, una proteína integral de membrana enriquecida en músculo que sirve de andamiaje para las caveolas y organiza microdominios de señalización en el sarcolema. La caveolina-3 regula el tráfico de membrana, la mecanotransducción y la homeostasis lipídica, y modula vías como la señalización del receptor de insulina/PI3K–AKT, la señalización de óxido nítrico y la localización de canales iónicos. A través de interacciones con el complejo distrofina–glicoproteína y elementos del citoesqueleto, la caveolina-3 contribuye a la estabilidad de la membrana durante la contracción y participa en el acoplamiento excitación–contracción. La desregulación o las mutaciones de CAV3 se asocian con fenotipos del músculo esquelético y cardíacos, lo que la convierte en una diana relevante para estudiar la biología de las caveolas, la integridad sarcolemal y la señalización de respuesta al estrés en células humanas.

Las partículas de activación lentiviral caveolin-3 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de CAV3 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral caveolin-3 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción CAV3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de caveolin-3. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo CAV3 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.