caveolin-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-419479-ACT

O gene Cav1 de camundongo codifica a caveolina-1, uma proteína de andaime das cavéolas que organiza microdomínios de membrana e regula a endocitose, a mecanotransdução e a homeostase lipídica. A caveolina-1 modula a sinalização por vias que incluem integrina/FAK–SRC, MAPK/ERK, PI3K–AKT e eNOS, influenciando a adesão celular, a migração e respostas vasculares dependentes de óxido nítrico. Em compartimentos imunes e estromais, Cav1 afeta a sinalização de citocinas e o tráfego vesicular, enquanto em tecidos adiposo e endotelial contribui para o manejo de lipídios e a função de barreira. A expressão desregulada de caveolina-1 ou a dinâmica das cavéolas tem sido associada a respostas de fibrose alteradas, fenótipos metabólicos, disfunção pulmonar e vascular e invasão e metástase de células tumorais dependentes do contexto, sustentando ampla utilidade em estudos de mecanismos de doença.

caveolin-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Cav1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

caveolin-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Cav1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Cav1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de caveolin-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Cav1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de caveolin-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via caveolin-1 em células tumorais com expressão de Cav1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.