cathepsin C CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401814-ACT

CTSCはカテプシンC（ジペプチジルペプチダーゼI）をコードしている。カテプシンCはリソソームに局在するシステイン型エキソペプチダーゼで、N末端からジペプチドを切り出すことで、骨髄系細胞および細胞傷害性リンパ球の顆粒内に存在する各種セリンプロテアーゼ前駆体（ザイモーゲン）を活性化する。好中球エラスターゼ、カテプシンG、プロテイナーゼ3、ならびにグランザイムの活性化を制御することにより、カテプシンCはリソソーム／顆粒の生物学を、自然免疫のエフェクター機能、炎症シグナル伝達、そして細胞外マトリックスのリモデリングと結び付けている。そのためCTSC活性は、白血球の脱顆粒、抗菌防御、プロテアーゼ駆動性の組織恒常性を制御する経路に関与する。CTSCの機能や発現の変化は免疫調節異常や炎症性表現型と関連づけられており、感染生物学、好中球介在性病態、プロテアーゼ依存的リモデリングといった文脈で研究されている。

cathepsin C CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CTSCの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

cathepsin C CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CTSC 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCTSC転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性cathepsin Cの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCTSC遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるcathepsin C依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCTSC発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるcathepsin C経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。